下面介绍的内容主要就是在测量菌液电导率的实验中,介绍需要用的仪器设备以及测定方法,电导率的测定少不了的仪器就是上海雷磁仪器厂生产的电导率仪DDS-307A,下面从实验室仪器需要以及实验方法进行简单介绍。
1、仪器与设备
上海安亭科学仪器厂生产的高速冷冻离心机;FluoroMax-4荧光光谱仪法国;JSM-6360LV扫描电子显微镜日本电子株式会社;LGJ-12冷冻干燥机北京松源华兴科技发展有限公司;S-3000N型扫描电子显微镜、H-7650型透射电子显微镜日本日立公司;EM UC6超薄切片机 德国Leica公司;上海雷磁仪器厂生产的DDS-307A型电导率仪上海智光仪器仪表有限公司;UV-2450紫外-可见分光光度计日本岛津公司;HP6890气相色谱仪(配5973质谱检测器) 美国安捷伦科技有限公司。
2、方法
单离香料气相熏蒸大肠杆菌及最低抑菌浓度和最低杀菌浓度的测定:大肠杆菌超显微结构观察取正常培养和经200μL/L芳樟醇处理24h的大肠杆菌含菌平板,固定样品,通过扫描电子显微镜和透射电子显微镜来观察大肠杆菌超显微结构。
上海雷磁DDS-307A电导率分析:取正常培养和经芳樟醇处理的大肠杆菌含菌平板,用无菌水收集菌体,用分光光度计将各菌悬液调OD600nm至1.000±0.005,用上海雷磁DDS-307A电导率仪测各菌悬液电导率。
紫外吸收的测定:参考方法,取菌悬液在11000 r/min条件下离心10min,取3mL上清液,用紫外分光光度计在260nm波长处测定OD值。
大肠杆菌DNA电泳分析:取1.5 mLOD600nm为0.5的菌悬液,按DNA提取试剂盒操作在8000r/min条件下离心2min,弃上清液,提取菌体内的DNA,以Tris-硼酸缓冲液配制质量分数0.8%凝胶(加入0.06%的GoldView染料),潜水点样,100V稳压电泳30min,于紫外凝胶图像分析仪下观察DNA条带亮度的变化,拍照并分析结果。
可溶性蛋白质量浓度的分析:以牛血清白蛋白为标准蛋白绘制标准曲线。取菌液于7000r/min离心10min。参照方法,取0.3mL上清液并将其稀释至1 mL,加入5mL考马斯亮蓝G-250显色液(含体积分数0.01%考马斯亮蓝G-250、4.7%乙醇、8.5%磷酸),振荡混匀,5 min后测其在595 nm波长处的吸光度,根据标准曲线计算出相应样品的蛋白质量浓度。
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